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使用顯色液時需要注意哪些要點?
更新時間:2022-03-25   點擊次數:831次
  顯色液SDS-PAGE電泳后,蛋白質按照分子量大小分離,轉移到固相載體( 例如硝酸纖維素薄膜)后,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶標記的二抗體起反應,經過底物顯色以檢測電泳分離的特異性的蛋白。
 
  顯色液的使用要點:
 
  1.請根據一抗來源選擇試劑盒.
 
  2 westem blotting DAB顯色法操作簡單,但其敏感性與ECL發光發有一定的差距,一般只適用于豐度較高的蛋白.
 
  3.可以根據顯色結果來優化實驗反應時間。如背景過深,可延長膜封閉時間,加長較終漂洗次數與時間。如果條帶過弱,同遠長抗體孵育時間。
 
  4.如果*沒有條帶,請檢查前期蛋白處理及實驗過程,如果確認無誤, 反復兩次依舊無結果,請換用ECL發光法顯色。
 
  5. TBST (0.01M)配制方法:稱取NaCl8.5g,Tris 1.21g,用800ml的雙蒸水溶解,用鹽酸調PH到76,再
 
  加入0SmlTween-20,用雙蒸水加至1000ml,混勻即可。(也可按照自己的配制習慣來配制)
 
  顯色液的保存:
 
  -20C避光密閉保存,- 年有效。若經常使用,可將封閉試劑,抗體稀釋液和20倍DAB顯色液B存放于2-8C以方便使用。

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